新选组(しんせんぐみ、shinsengumi)是日本幕末时期一个亲幕府的武士组织，也是幕府末期浪人的武装团体。主要在京都活动，负责维持当地治安，对付反幕府人士。他们在戊辰战争中协助幕府一方作战，1869年战败投降后解散。
新选组，外号“壬生狼”，在成立初期得到当时担任京都守护职的会津藩主松平容保支持，并纳入会津藩编制。新选组在1864年的池田屋事件中，重创了京都内提倡尊王攘夷的激进派。新选组最为人所知的特色有“诚”字队旗、衣袖上印有山形图案的独特羽织(一种外衣)、严厉的“局中法度”(为维持组织纪律而采用的严厉规条)等。
新选组是民间与幕府联合的组织，为时任京都守护职的会津藩主松平容保所支持。日本幕末时期，反幕府浪士常在京都刺杀幕府官员及亲幕府人士。因此，出现了新选组内部的主流派——“试卫馆派”不断肃清反对派。
文久二年(1862年)，江户幕府将军德川家茂上京之际，清河八郎提议募集浪士组成将军警护，得到幕府采纳。江户幕府采取怀柔政策控制浪人，特组织浪士组。
文久三年(1863年)二月(日本旧历，下同)，200多名浪士到达京都。清河与勤王势力私通，企图把那些浪士作为天皇配置下的兵力。计划败露后，清河及200余人离开京都，向江户进发。以近藤勇、土方岁三为中心的试卫馆派及以芹泽鸭为中心的水户浪士留在京都。
同年三月，近藤勇、芹泽鸭等人成立新选组的前身“壬生浪士组”(又名“精忠浪士组”)，从此新选组又被称为“壬生狼”。他们在壬生村招募新成员，组成了36人的队伍。京都守护职松平容保委派他们维持京都市内治安，对付倒幕派的浪士们。因领导人之一清河八郎与尊攘派串通而分裂，清河回江户不久被暗杀。留在京都的近藤勇、芹泽鸭等归属京都守护职松平容保支配，组成新撰组。
同年八月十八日，政变发生，壬生浪士组协助幕府势力有功，得到朝廷赐名“新选组”(另有说法是松平容保赐名“新选组”)。
文久三年(1863年)九月，近藤派肃清了芹泽派。冲田总司，土方岁三，山南敬助，原田左之助等人暗杀芹泽，近藤勇控制了新选组，成为领导人(称为“局长”)。近藤勇、土方岁三掌握实权，全力镇压尊攘、讨幕派。
元治元年(1864年)六月五日新选组在池田屋事件中重创了京都倒幕派的力量。新选组在七月的禁门之变中，协助幕府击退长州藩的倒幕派进攻。这两次事件使新选组得到朝廷、幕府和会津藩赏赐二百多两黄金。
同年九月，新选组进行第二次招募队员，队员增至超过二百人，驻地从壬生村迁移到西本愿寺(京都市下京区)。
庆应三年(1867年)三月，新选组的伊东甲子太郎、藤堂平助一派受命成为孝明天皇的御陵卫士，脱离新选组，同年十一月被新选组肃清。