据说通过检测光绪留下的头发和衣服，确定他的死因是砒霜中毒急性发作而死。一时之间关于究竟是谁毒杀光绪的猜测众说纷纭。比较流行的说法是：慈禧、李莲英、袁世凯最可疑。
但分析起来实则并非如此。慈禧确实想置光绪于死地，可按她当时的病情来看，她已经无力安排毒杀光绪了，就是安排人，可能也不会有人听她的而为自己留下后患。
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说 袁世凯毒杀光绪，也属戏言。因为身在宫外的袁世凯不可能有机会。至于李莲英：他对慈禧惟命是从。可是他内心里还是非常同情光绪的，在“西狩”路上，他曾经 冒着得罪慈禧的风险将自己的被褥献给光绪，光绪对他的印象也挺好，甚至说没有他自己将会更加受苦。此时慈禧命悬一线，他不会去毒杀和自己关系尚好的光绪。
实际上，杀害光绪的最大嫌疑人应该是隆裕皇后。为什么呢?
“光 绪之死”是上世纪初的重大历史事件，关于光绪的死因却众说纷纭，成为近代史上的一桩谜案。有人认为，慈禧不愿意光绪在自己死后重新掌权，派人毒死了光绪。 有人说，戊戌变法时袁世凯出卖光绪，怕慈禧死后遭光绪报复，于是贿赂太监下毒。还有说是太监李莲英下的毒，因为他得悉光绪日记中说慈禧死后将诛袁世凯和 他。但也有人认为光绪是身体虚弱病死。
首先是光绪伤害她很深。隆裕的母亲是慈禧的胞妹。因此，隆裕7岁开始就在慈禧身边长大，后来被强指给比自己小三岁的光绪为后。在指婚的现场，光绪就不想将定亲的信物给她，是在慈禧的威逼下，她才拿到信物的。
光 绪帝在大婚之夜只对她客气有加，没有亲近她。对于隆裕的娘家，光绪也十分无礼。当时，有一婚俗，就是在大婚第四天，皇帝要宴请皇后娘家，光绪借口劳累过 度，取消了婚宴，还把筵宴礼分赐给在京王公大臣。作为女人一生中最风光的事情，就让光绪给砸了。如此，隆裕皇后能不记恨光绪吗?二人有夫妻 之名，没有夫妻之实。光绪最爱的是珍妃，只有和珍妃在一起的时候才能有说有笑，而一见到隆裕他就板起面孔，而且根本不到皇后的宫中去。一次隆裕请安之后， 光绪命她退下，但是她装作没听见，盛气凌人地看着珍妃等人。光绪盛怒之下，竟将隆裕的一枚价值连城的发簪(乾隆时的遗物)掷得粉碎。从此两人更加互相衔恨。
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1894年10月，珍妃被慈禧降为贵人，并且遭到“褫衣廷杖”的当众羞辱，最主要的原因是隆裕向慈禧密报珍妃对她“大不敬”。在宫中有一个不成文的规定，“宫女一般是不许打脸的”，而这一次，隆裕打了珍妃的嘴巴，这样一来，光绪对隆裕的态度更加恶劣。
由 于婚姻不幸，又受慈禧感染，隆裕心狠手辣。隆裕在宫里是最不得人心的，脾气很坏，因为得不到皇上的宠爱，身边没有一个贴心的人，底下人都怕她乱发脾气。她 经常找碴打骂宫女，就是对小动物也缺少慈爱之心，她养的猫不超过半个月，就会被她打走或者踩伤踩死。须知，那时养猫是宫女们重要的消遣事，她却不怕犯众怒 而干此残忍的事情，可见心肠歹毒。
最重要的是，她撞上了一个时机。慈禧病重之后，宫中大事小情由她主持，而且她居然打理得井井有条。为慈禧 画像的英国人加尔女士在自己的作品《慈禧写照记》中的描述说：“皇后(隆裕)其才能如何，虽不可知，然当太后退休(指患病后)之际，宫中诸事，皆由后勾当 之，其举措井井，殊不亚于乃姑也。”
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如果光绪不死，在慈禧过世后出来执掌朝政，可能第一件要做的事就是废掉皇后，祭奠珍妃，加封封号。这是任何人都能料得到的。所以，她决然要铤而走险，毒死光绪以维持自己的权威。
光 绪被软禁之后，只有她陪在身边，御医给皇帝看病用药都必须经过皇后过目。虽然光绪体弱多病，但能照常每天给慈禧请安，身体并没有什么大碍。可是，突然之间 就殡天了。有人说是吃了慈禧赐给的酸奶，也有人说就是药中有毒。但无论哪样，这些东西都必须经过隆裕之手，她是脱不开干系的。光绪之死在所有嫌疑人里，无 疑隆裕的嫌疑是最大的。